中藥飲片檢測色譜儀是一種基于色譜技術(shù)的分析儀器,它能夠?qū)χ兴庯嬈械某煞诌M行高效、精準的定性和定量分析。其主要利用不同物質(zhì)在固定相和流動相之間的分配系數(shù)差異,通過色譜柱進行分離。在分離過程中,樣品被注入色譜柱,流動相攜帶樣品通過色譜柱,不同成分在色譜柱上的保留時間不同,從而實現(xiàn)分離。分離后的成分被檢測器檢測,并轉(zhuǎn)化為電信號進行記錄和分析。
中藥飲片檢測色譜儀的操作步驟如下:
1、樣品準備:
粉碎與混合:將中藥飲片粉碎成均勻粉末,確保樣品具有代表性。
提取有效成分:使用適量溶劑(如甲醇、乙醇)對樣品進行超聲處理,使有效成分充分溶解。
離心沉淀:通過離心處理去除固體顆粒,取上清液作為供試品溶液。
過濾處理:供試品溶液需經(jīng)孔徑為0.45μm的濾膜過濾,必要時進行預(yù)凈化,防止污染色譜系統(tǒng)。
2、儀器準備:
流動相配制:使用色譜純試劑配制流動相,根據(jù)實驗要求調(diào)整比例(如甲醇-水混合液)。流動相需經(jīng)0.45μm濾膜過濾并脫氣處理。
色譜柱安裝:選擇適合目標(biāo)化合物分離的色譜柱(如C18柱),確保安裝方向正確,避免劃傷或扭曲。
系統(tǒng)平衡:啟動色譜儀,用流動相沖洗色譜柱至壓力穩(wěn)定(約30分鐘),確?;€平穩(wěn)。
3、參數(shù)設(shè)置:
流速與溫度:根據(jù)色譜柱要求設(shè)置流速(如1mL/min)和柱溫(如30-40℃)。
檢測波長:根據(jù)目標(biāo)化合物特性設(shè)定檢測波長(如丹皮酚檢測波長為274nm)。
進樣量:根據(jù)儀器類型選擇進樣量(如手動進樣10-20μL,自動進樣按程序設(shè)定)。
4、進樣操作:
手動進樣:使用微量注射器抽取供試品溶液,注入六通閥進樣器,快速切換至進樣位置。
自動進樣:將供試品溶液裝入進樣瓶,放入自動進樣器貯樣室,按程序設(shè)定進樣參數(shù)(如起始位置、進樣體積)。
5、數(shù)據(jù)采集與分析:
啟動數(shù)據(jù)采集:進樣后立即啟動色譜工作站,記錄色譜圖,包括峰面積、保留時間等參數(shù)。
基線校正:在數(shù)據(jù)采集過程中進行基線校正,確保數(shù)據(jù)準確性。
含量計算:利用標(biāo)準曲線法或內(nèi)標(biāo)法計算目標(biāo)物質(zhì)含量,重復(fù)進樣至少2次,取平均值。
6、結(jié)果驗證與報告:
系統(tǒng)適用性試驗:檢查理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性等指標(biāo)是否符合要求(如理論板數(shù)≥5000)。
結(jié)果驗證:通過質(zhì)控樣品或加標(biāo)回收實驗驗證結(jié)果準確性。
打印報告:使用色譜工作站生成檢測報告,包括色譜圖、峰面積、含量結(jié)果等信息。
7、儀器關(guān)機與清洗:
關(guān)閉檢測器:按程序關(guān)閉檢測器(如火焰離子化檢測器需先熄火)。
色譜柱清洗:用高比例有機相(如甲醇)沖洗色譜柱,去除殘留雜質(zhì)。
關(guān)閉儀器:依次關(guān)閉泵、進樣器、檢測器等模塊,斷開電源,清潔儀器表面。